菌落原位雜交法的步驟

①將硝酸纖維素濾膜置於含抗生素的平皿瓊脂培養基上，用無菌牙籤挑取單菌落種於濾膜和主瓊脂平板上，排列成方格柵，膜和板上菌落位置相同。

②培養細菌至產生1-2mm大小的菌落。

③在一塊平皿中置4張濾紙，用10%SDS浸透，倒掉多餘液體，將帶有菌落的濾膜取下輕輕置於濾紙上，菌落面在上，注意防止濾膜底面存有氣泡。

④5min後，將濾膜轉至用變性溶液（0.5mol/L NaOH，1.5mol/LNaCl）浸溼的濾紙上，放置10min。

⑤將濾膜轉至中和溶液（1.5mol/L NaCl， 0.5mol/L Tris-HCl

pH8.0)浸溼的濾紙上，放置10min，重複中和一次。

⑥將濾膜移至用2×SSPE溶液浸過的濾紙上，放置10min，SSPE配成20×貯備液：3.6mol/L NaCl，0.2mol/L

NaH2PO4(pH7.4)，20mmol/L EDTANa2（pH7.4)。

⑦將濾膜用濾紙吸乾，80℃真空烘乾2h。