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dna怎么插入载体

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运载体多为质粒,是很稳定且牢固的环状dna。

dna分子就像梯子,梯子的扶手由磷酸二酯键构成,非常牢固,要限制性内切酶才能切开。

切开后质粒会出现两个粘性末端,所以必须用相同的内切酶切下目的基因,这样目的基因和粘性末端才能接合。

基因工程的基本操作步骤主要包括四步:(1)目的基因的获取,即提取目的基因(2)基因表达载体的构建,即使目的基因与运载体结合(3)将目的基因导入受体细胞(4)目的基因的检测与表达,即检测目的基因的表达是否符合特定性状要。

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dna插入载体都是用一种方法,限制性内切酶法。整个过程的原理:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其克隆中的目的基因提取分离出来。

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首先用同一种限制性内切酶对dna模板和载体进行酶切,然后用dna连接酶使dna跟载体的粘性末端进行连接。然后对载体进行培养,达到插入载体的目的。

标签: 载体 dna
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