dna序列分析与预测基本步骤
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操作步骤:
1、 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。
2、 将膜的DNA面朝上置于杂交管中,ATP溶液的加入量为约1 ml/cm2 膜,在68℃杂交炉中滚动3 h。
3、 在预杂交即将结束时,于100℃将DNA探针变性10 min,置于冰中。
4、 将杂交管中的APH溶液倒掉,换上等体积的预热的APH溶液(68℃),加入变性探针,68℃滚动下杂交过夜。
5、 倒掉APH液,加入等体积的2×SSC/0.1%SDS,室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。
6、 用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液,室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液。
7、 如果需要,在42℃,0.2×SSC/0.1%SDS进行15 min 中等严紧度的洗膜2次。
8、 如果需要,在68℃,0.1×SSC/0.1%SDS进行15 min 高等严紧度的洗膜2次。
9、 倒掉最后的洗膜液,在室温下用2×SSC漂洗膜,并吸干多余的液体,用塑料膜包裹后放射自显影。
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